ROS線粒體活性氧產(chǎn)生速率測試盒熒光法

常見樣本處理方法：

1、血清（漿）樣品：直接檢測。

2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備： 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL提取液） ，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復(fù)30 次）8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，

加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明！

商品介紹：

測定意義

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機(jī)體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設(shè)計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。
特點：

1、優(yōu)化設(shè)計的實驗方案，1小時即可完成

2、靈敏度高，操作便捷

3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時，即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般可采用目視比色。

2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì)量和軟件的算法。

注意事項：

①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)檢測試劑盒香蜂草苷1-烷 99%4-(1-羥乙)吡啶 98%

狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)檢測試劑盒香荊芥酚殼聚糖  脫乙酰度≥95%, ,粘度100-200 mpa.s4(5)-羥咪唑鹽鹽 98%

血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒香蘭素羧化殼聚糖 BR,水溶性(R)-3-羥吡咯烷鹽鹽 98%

血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒香蒲新苷殼聚糖 低粘度：<200 mPa.s4-苯酯 98%

血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒香葉殼聚糖 中粘度200-400 mPa.s2-苯酯 98%

血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒香葉木素殼聚糖 高粘度>400 mPa.s3--4-氨吡啶 95%

卵泡抑素(FS)檢測試劑盒香葉木素-7-O-葡萄糖苷D（+）-氨葡萄糖鹽鹽 ≥99%吲哚-2-羧 98%

卵泡抑素(FS)檢測試劑盒香紫蘇D（+）-氨葡萄糖鹽鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品吲哚-3-羧 98%

狀腺素抗體(TAb)檢測試劑盒香紫蘇二亞砜 分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）1-環(huán)戊 99%

狀腺素抗體(TAb)檢測試劑盒香紫蘇內(nèi)酯K3 分析標(biāo)準(zhǔn)品1--3-吲哚 97%

兒茶酚(CA)檢測試劑盒消旋山莨菪萘醌 98%5-異噁唑-4- 98%

兒茶酚(CA)檢測試劑盒小白菊內(nèi)酯1000℃節(jié)能箱式電爐 SX-G071033,3-二烯酯 98%

半胱氨抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測試劑盒小檗三正丁氧化膦 95%3--4- 99%

半胱氨抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測試劑盒小檗紅 90%3-(5--1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

乙酰膽受體抗體(AChRab)檢測試劑盒小檗紅硫酯肌 99%4-(5--1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

乙酰膽受體抗體(AChRab)檢測試劑盒小檗硫代硫銨 60%溶液6-吲哚 98%
ROS線粒體活性氧產(chǎn)生速率測試盒熒光法CD93抗體α-氟代-β-氨 Pramipexole 2HCL monohydrate

嗜粒趨化蛋白CCL6抗體α-吡啶（標(biāo)準(zhǔn)品） Vinblastine Sulfate

6號染色體開放閱讀框81抗體α-三聯(lián)噻吩（標(biāo)準(zhǔn)品） Vinblastine Sulfate

巨噬炎性蛋白1β抗體α-戊二(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinblastine Sulfate

NK抑制性受體2DL4抗體β-Estradiol（標(biāo)準(zhǔn)品） Temozolomide

NK抑制性受體2DS4抗體β-氨(標(biāo)準(zhǔn)品) Temozolomide

NK抑制性受體3DL1抗體β-環(huán)糊精（標(biāo)準(zhǔn)品） Aminoglutethimide

7號染色體開放閱讀框46抗體(標(biāo)準(zhǔn)品) Aminoglutethimide

蛋白磷酶PP2A癌抑制蛋白抗體(標(biāo)準(zhǔn)品) Flutamide