aFABP脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白ELISA試劑盒

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

色素b561(cytb561)試劑盒異鼠李素-3-O-葡萄糖3-溴 98%4--3-氟苯 97%

色素b561(cytb561)試劑盒異鼠李素-3-O-新3-溴 分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于環(huán)境分析3-苯  98%

脂質(zhì)運載蛋白2(LCN2)試劑盒異環(huán)溴 98%2- 97%

脂質(zhì)運載蛋白2(LCN2)試劑盒異甜菊叔丁二苯硅烷 98%3-苯  97%

脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(aFABP)試劑盒異土木香內(nèi)酯俾斯麥棕Y Biological stain4-苯  97%

脂肪型脂肪結(jié)合蛋白(aFABP)試劑盒異內(nèi)酯2--3-硝吡啶 >99.0% (HPLC)3-羧-4-氟苯 97%

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)試劑盒異戊二烯2-羥吡啶 97%3-羧-5- 97%

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)試劑盒異夏佛塔桑色素 Indicator3--4- 97%

葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3)試劑盒異香蘭素桑色素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥983--4-氧苯 95%

葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3)試劑盒異香蘭2--3-三氟 99%3,5-二氟苯 98%

視黃結(jié)合蛋白(RBP)試劑盒異銀杏雙黃  ≥99.0% (HPLC)2,4-二苯  98%

視黃結(jié)合蛋白(RBP)試劑盒異櫻花亭標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：3,5-二苯 98%

8羥脫氧鳥(8-OHdG)試劑盒異澤蘭黃素 植物培養(yǎng)級，>99.0% (HPLC)二苯并噻吩-4- 95%

8羥脫氧鳥(8-OHdG)試劑盒異紫花前胡內(nèi)酯,二水 99%3,4-二苯 97%

羥賴氨(Hyl)試劑盒異紫堇定苯 97%3,4-二氟苯 98%

羥賴氨(Hyl)試劑盒益母草羅丹明6G Biological stain2,3-二苯 97%
aFABP脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白ELISA試劑盒本品以的吉姆薩色素、甲醇為主要原料，含*襯染劑，經(jīng)研磨配制而成，能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果。經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色。吉姆薩染色液由吉姆薩貯存液(10×)和磷鹽緩沖液組成，10×貯存液可以單獨使用，也可以1:9混合成工作液后使用。

吉姆薩色素是由天青Ⅱ與伊紅混合而成。吉姆薩染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同，吉姆薩染色液對胞漿著色力較強，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，特別是對血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜性、嗜堿性顆粒，著色清晰，但是對細(xì)胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳，故吉姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。

一、一步法涂片染色

1、吉姆薩工作液的配制：

按吉姆薩貯存液(10×):磷鹽緩沖液=1:9混合，即取1份吉姆薩儲存液(10×)加入到9份的磷鹽緩沖液中充分混勻，即為吉姆薩工作液，該工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1-3分鐘。

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加吉姆薩工作液覆蓋涂片，室溫滴染。

4、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。

5、干燥、鏡檢。

6、染色結(jié)果：

嗜性顆粒————粉紅色；

嗜堿性顆粒————紫藍色；

中性顆粒—————淡紫色

二、兩步法涂片染色

1、吉姆薩工作液的配制：

按吉姆薩貯存液(10×):蒸餾水=1:4混合，即取1份的吉姆薩貯存液(10×)加入到4份的蒸餾水中充分混勻，即為吉姆薩工作液。吉姆薩工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定。

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加適量吉姆薩工作液覆蓋涂片，室溫滴染。

4、加入等量磷鹽緩沖液，輕輕晃動載玻片，室溫靜置。

5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。