eIF3a真核翻譯起始因子3aELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

尿激(UK)試劑盒 L-亮氨（白氨）D-蛋氨 99%霉酚嗎啉乙酯 分析標準品，≥98%

尿激(UK)試劑盒 L-鳥氨鹽鹽L-正纈氨 99%新 分析標準品，≥97%

磷烯式羧激(PCK)試劑盒L-蘋果L-正亮氨 99%新芒果 分析標準品，≥98%

磷烯式羧激(PCK)試劑盒L-羥脯氨D-鳥氨鹽鹽 99%蕓香柚皮 分析標準品，≥98%

胰蛋白(trypsin)試劑盒 L-乳L-鳥氨鹽鹽 98%補骨脂素  分析標準品，≥98%

胰蛋白(trypsin)試劑盒 L-色氨L-苯氨叔丁酯鹽鹽 99%補骨脂素  98%

β位淀粉樣前體蛋白裂解1（BACE1）試劑盒L-鼠李糖DL-苯氨 >98.0%(HPLC)枸橘 分析標準品，≥98%

β位淀粉樣前體蛋白裂解1（BACE1）試劑盒L-絲氨L-苯氨酯鹽鹽 98%苦鬼臼素 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構前體(PDI)試劑盒L-蘇氨D-苯氨 98%原 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構前體(PDI)試劑盒L-天冬氨D-脯氨 99%槲皮 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構A3(PDIA3)試劑盒L-天冬酰D-絲氨酯鹽鹽 98%金絲桃 分析標準品，≥98%

蛋白二硫化物異構A3(PDIA3)試劑盒L-纈氨D-絲氨 98.5%槲皮素 分析標準品，≥98.5%

山梨脫氫(SDH)試劑盒L-異亮氨DL-絲氨 98%槲皮素 97%

山梨脫氫(SDH)試劑盒L-組氨L-絲氨酯鹽鹽 98%吳茱萸次 分析標準品，≥98%

肽脯氨酰順反異構(PPI)試劑盒L-組氨鹽鹽D-蘇氨 99%吳茱萸次 98%

肽脯氨酰順反異構(PPI)試劑盒MilataxelD-色氨酯鹽鹽 98%迷迭香 分析標準品，≥97%
eIF3a真核翻譯起始因子3aELISA試劑盒分子量：651.01

外觀：淡黃色粉末

溶劑：水或者DMSO

光學特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm.

儲存：-20℃，避光，有效期兩年。

Hoechst 系列染料是一類可用于應用于熒光顯微鏡和流式細胞術分析的標記DNA 的熒光家族染料。因其可以標記DNA，所以這類染料被廣泛的應用于細胞核和線粒體的可視化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作為類二苯甲亞胺的染料，是其中廣泛應用的核染料。這兩種染料都可以被350nm 左右的紫外光激發，發射461nm 左右的藍紫色熒光。Hoechst 染料可以用于固定或者活細胞染色，也通常被用于另一種核染料的替代物，DAPI。他們之間重要的區別在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有親脂性，因此更易于穿過細胞膜。在一些應用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表現出較差的膜透性。這類染料也常被用于檢測樣本DNA 的含量，只需要設置一個熒光強度-DNA 含量之間的標準曲線即可。

本產品是一種長波的核黃染料，通用和退行性示蹤標志染料真藍做神經元的雙色標記。在神經元細胞中，核黃優先染色細胞核為黃色熒光，而真藍作為一種紫外激發光激發的二價陽離子染料可以染色細胞質為藍色熒光。兩種染料在免疫組織化學應用中的表現都非常穩定，可以用于和DAB 染料的聯合應用。當Hoechst33258、Hoechst33342 和核黃通過軸突逆行運輸到母細胞體后，可能會遷出軸突和母細胞體，因此可以作為毗鄰神經膠質細胞細胞核的熒光染料。這種遷出現象在體內和體外的研究中，當您將切片保存于水性環境下，都有發現。使用1%示蹤劑時，活體內的遷出現象可以通過限制動物的生存時間而加以控制。體外的遷出現象可以通過材料組織的快速處理來避免。