hnRNP C異質性胞核核糖核蛋白CELISA試劑盒

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

淋巴功能相關抗原2(LFA-2/CD2)試劑盒鳳仙萜四FD-核糖 用于植物培養，≥99%（HPLC)4-(反-4-戊環己)苯 99%

白三烯E4(LTE4)試劑盒 beta-澳洲茄邊烯, CP,>98%(GC)咪唑煙 分析標準品，99.5%

白三烯E4(LTE4)試劑盒 Levatin液體石蠟 CP柄曲菌素 分析標準品

D二聚體(D2D)試劑盒丹參B 鎂鹽液體石蠟 輕質、密度：0.84-0.86檸檬鐵 AR

D二聚體(D2D)試劑盒次皂甙元CP4液體石蠟 重質、密度：0.86-0.89氨水 for HPLC，≥25% in H2O

免疫球蛋白E(IgE)試劑盒次皂甙元CP6啉 AR,99%氨水 ACS, 28.0-30.0% NH3 in water

免疫球蛋白E(IgE)試劑盒一枝蒿庚素； 準葛爾1,3,5-三苯 CP,97%氨水 ≥28% NH3 in H2O,電子級

髓系觸發受體-1(TREM-1)試劑盒齊墩果3-O-beta-D-葡吡喃糖(1→2)-alpha-L-吡喃阿拉伯糖1,2,4,5-四 98%異 P級

髓系觸發受體-1(TREM-1)試劑盒酰D1,2,4,5-四 95%鄰氨 98%

白調節素(LR)試劑盒去氫海1,2,4,5-四 NMR定量標準品，99.8%(GC)鄰氨 分析標準品，99.5%

白調節素(LR)試劑盒去氫紫堇1,2,3-三苯 91%鄰氨 99%

血小板生成素(TPO)試劑盒1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐]-2-異丁蘋果酯1,2,3-三苯 分析標準品3-氨吡啶 99%

血小板生成素(TPO)試劑盒丹參酯1,2,4-三苯 98%2-氨-4- 97%

白血病抑制因子(LIF)試劑盒20R-參皂Rg21,2,4-三苯標準溶液 1mg/ml ，用于水質分析2'-氨苯乙 97%

白血病抑制因子(LIF)試劑盒三七素1,2,4-三苯 分析標準品2-氨-4-酚 98%

Salusin-α 試劑盒齒孔; 齒孔菌1,2,4-三苯 Standard for GC，≥99.5% (GC)5-氨吲哚  97%
hnRNP C異質性胞核核糖核蛋白CELISA試劑盒熒光染料PKH67 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。

PKH67對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。

在細胞分裂增殖過程中，PKH67 的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2 的熒光強度)，二次(1/4 的熒光強度)，三次(1/8 的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67 可檢測分裂次數多達六次甚至更多。

除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。

PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。

PKH67標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。

PKH67標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。

儲存條件：-20℃避光保存。