hnRNP M異質(zhì)性胞核核糖核蛋白MELISA試劑盒

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

異常凝血原(APT)試劑盒 5-羥-4,7-二氧黃二酯 99%2-乙酰噻吩 99%

循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)試劑盒5-羥-4-氧鐵屎米乙酰水楊 99%2-溴噻吩 98%

循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)試劑盒5-羥-7-乙酰氧-8-氧黃乙酰水楊 用于植物培養(yǎng), ≥99.0%2,5-二溴噻吩 96%

血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)試劑盒 5-羥-7-乙酰氧黃水楊酯 AR,99%3-噻吩 98%

血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)試劑盒 5-戊水楊酯 CP,98%噻吩-2- 98%

血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)試劑盒 5-乙酰氧-7-羥黃水楊酯 藥用級(jí),99%噻吩-2-羧 99%

血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)試劑盒 5-乙酰氧羅漢松脂酚二水楊酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)2-噻吩乙酰 98%

纖溶原(Plg)試劑盒 6,7-二羥薄荷素  水楊 AR,99.5%2-噻吩乙 98%

纖溶原(Plg)試劑盒 6,8-二異戊烯金雀異黃素水楊 Ph. Eur., BP, USP, 99.5-100.5%噻吩 Standard for GC，>99.5%

性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)試劑盒 6-O-咖啡酰熊果甙水楊鈉 AR,99.5%噻吩 99%

性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)試劑盒 6-O-香草酰筋骨草水楊鈉 CP,99.5%噻吩-2-乙 98%

免疫球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)試劑盒 6-阿魏酰梓水楊酰 99%3-噻吩 98%

免疫球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)試劑盒 6-氧當(dāng)歸素水楊酰 USP級(jí)對(duì)氨苯乙 AR

肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)試劑盒6-氧柚皮素水楊酰 matrix substance for MALDI-MS三正丁疊氮化錫  98%

肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)試劑盒6-羥豆甾-4-烯-3-苯 重蒸餾, ≥99.5%2,4,6-三氮酚　 分析標(biāo)準(zhǔn)品

皮膚淋巴相關(guān)抗原(CLA)試劑盒7Alpha-羥豆甾α,α,α-三苯 99%對(duì)乙酰氨苯磺酰疊氮 95%
hnRNP M異質(zhì)性胞核核糖核蛋白MELISA試劑盒鈣離子檢測(cè)試劑盒采用Fluo-3,AM 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針檢測(cè)鈣離子。

Fluo-3,AM穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。

Fluo-3 游離配體幾乎是非熒光性的，其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。但是，當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，熒光會(huì)增加60 至100 倍，大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為 526nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm 左右，發(fā)射波長(zhǎng)為 525～530nm。可以使用熒光顯微鏡、酶標(biāo)儀、激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。