IGF-Ⅱ胰島素生長(zhǎng)因子ⅡELISA試劑盒

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)試劑盒 離心管 黑色化鑭，七水 99.9% metals basis3-吲哚丁 98%

小鼠A(CsA)試劑盒離心管 綠色結(jié)晶化鋰 SP激動(dòng)素 植物培養(yǎng)級(jí), ≥99.0% (HPLC)

小鼠A(CsA)試劑盒離心管 棕色鉛 flakes,SP 激動(dòng)素 99%

小鼠對(duì)氨苯(PABA)試劑盒精液離心管二氧化錳 SP1-萘乙 96%

小鼠對(duì)氨苯(PABA)試劑盒尖底離心管二氧化錳 99.99% metals basis誘蟲(chóng)烯 分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒圓底插口離心管硫鎂，七水 SP誘蟲(chóng)烯 93%

小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒圓底離心管硫鎂，七水 99.99% metals basis反-玉米素 98%

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)試劑盒圓底羅口離心管硫錳，一水 SP玉米素核 97%

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)試劑盒圓底插口離心管硫錳，一水 99.99% metals basis 80%，750 μg/mg

小鼠T活化連接蛋白(LAT)試劑盒離心管 管套式碳鎂 SP鹽倍他司汀 99%

小鼠T活化連接蛋白(LAT)試劑盒高速離心管式碳鎂 99.99% metals basis硫 1.5-2.0 units/mg

小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)試劑盒羅口離心管 平底白蓋硫鎳，七水  SP赫斯特?zé)晒馊剂希?3258 98%

小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)試劑盒羅口離心管 平底藍(lán)蓋鈮粉 99.95% metals basis,325目3,4-二氧 98%

小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)試劑盒離心瓶鈮粉 99.5%,200目鹽 98%

小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)試劑盒離心瓶硝鎳,六水 99.99% metals basis多烯紫杉 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%

小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)試劑盒 離心瓶硝鎳,六水  SPD-(+)-麥芽糖一水合物 ≥98.0% (HPLC)
IGF-Ⅱ胰島素生長(zhǎng)因子ⅡELISA試劑盒用途：

主要顯示由微絲構(gòu)成的應(yīng)力纖維，由于細(xì)胞對(duì)細(xì)胞基質(zhì)的附著和維持扁平鋪展的形狀，該纖維在體外培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞中尤其發(fā)達(dá)。

注意事項(xiàng)：

微絲染色液在染色過(guò)程中由于微觀結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，有些纖維在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法辨認(rèn)，因此能夠看到的纖維主要是由微絲組成的應(yīng)力纖維。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，12個(gè)月