AMOT血管動(dòng)蛋白ELISA試劑盒

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

兔子前列腺素E2(PGE2)試劑盒肌激(CK)試劑盒(肌比色法)Fmoc-O-芐-L-絲氨 98%雙草 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.3%

兔子前列腺素E1(PGE1)試劑盒淀粉(AMS)試劑盒(-淀粉比色法)FMOC-O-叔丁-L-絲氨  98%多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

兔子前列腺素E1(PGE1)試劑盒淀粉(AMS)試劑盒(-淀粉比色法)Fmoc-O-三苯-L-絲氨 98%多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%

兔子皮質(zhì)/上腺(CORT)試劑盒α-淀粉(α-AMS)試劑盒(硝水楊法)Fmoc-O-三苯-L-蘇氨 99% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

兔子皮質(zhì)/上腺(CORT)試劑盒膽酯(ChE)試劑盒(羥三化鐵微板法)N-alpha-芴氧羰-N-in-叔丁氧羰-L-色氨 97.0%標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%,體:

兔子皮質(zhì)(Cortisol)試劑盒膽酯(ChE)試劑盒(羥三化鐵比色法)Fmoc-L-酪氨 97%標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

兔子皮質(zhì)(Cortisol)試劑盒膽酯(ChE)試劑盒(羥三化鐵比色法)Fmoc-O-芐-L-酪氨 98%死蜱 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

兔子腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)試劑盒腺脫氨(ADA)試劑盒(微板法)Fmoc-O-叔丁-L-酪氨 98%死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6～3%，

兔子腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)試劑盒腺脫氨(ADA)試劑盒(比色法)Fmoc-O-叔丁-D-酪氨 99%死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=6～3%，

兔子內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒腺脫氨(ADA)試劑盒(比色法)Fmoc-D-纈氨 98%高效氟菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%

兔子內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒脂肪(LPS)試劑盒(比濁微板法)FMOC-L-氨五氟苯酯   98%高效氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%，體:石油

兔子內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒脂肪(LPS)試劑盒(比濁微板法)N-[(9H-芴-9-氧)羰]-D-氨五氟苯酯  98%高效氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%，體:石油

兔子內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒脂肪(LPS)試劑盒(比濁比色法)Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH 98%高效氟菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，96%

兔子免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 單氧化(MAO)試劑盒(苯腙比色法)N'-(4-氧-2,3,6-三磺酰)-D-精氨 98%氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%，體：正己烷

兔子免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 單氧化(MAO)試劑盒(苯腙比色法)N-Fmoc-N'-(均三苯-2-磺酰)-L-精氨  96%氟菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%，體：正己烷

兔子免疫球蛋白E(IgE)試劑盒5′-核(5′-NT)試劑盒(鉬藍(lán)比色法)FMOC-L-天冬氨五氟苯酯  98.5%菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97.5%
AMOT血管動(dòng)蛋白ELISA試劑盒用途：

又稱監(jiān)牢藍(lán)髓鞘染色，石蠟切片

注意事項(xiàng)：

分化步驟很重要，染色結(jié)果為：髓鞘呈藍(lán)綠色，細(xì)胞核呈紅色。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月