VPI血管活性肽酶抑制劑ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒 β-N-乙酰葡萄糖(NAG)試劑盒(PNP比色法)Fmoc-L-蘇氨 BR標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%（劇品）

兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒葡萄糖-6-磷脫氫(G6PD)定性試劑盒(熒光斑點(diǎn)法)Fmoc-L-天冬酰 BR酰嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，93%

兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒葡萄糖-6-磷脫氫(G6PD)試劑盒(簡(jiǎn)易微板法)Fmoc-L-谷氨酰 BR莠滅凈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.8%

兔子纖溶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒葡萄糖-6-磷脫氫(G6PD)試劑盒(6-PGD校正比色法)芴氧羰酰 99%唑嘧磺草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%

兔子纖溶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒激(PK)試劑盒(PEP比色法)N-酰-L-硫氨酰-L-白氨酰-L苯氨 97%標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%

兔子纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒氨氨轉(zhuǎn)移(ALT)試劑盒(賴氏微板法)N-酰-L-蛋氨  97%標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%

兔子纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒氨氨轉(zhuǎn)移(ALT)試劑盒(賴氏微板法)Fmoc-L-烯甘氨 98%γ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

兔子間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒氨氨轉(zhuǎn)移(ALT)試劑盒(賴氏比色法)芴氧羰酰D-Β環(huán)己氨 98%γ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%

兔子間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒氨氨轉(zhuǎn)移(ALT)試劑盒(賴氏比色法)2-氟-L-苯氨 99%聯(lián)苯菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒氨氨轉(zhuǎn)移(ALT)試劑盒(單試劑法)BOC-L-2-氟苯氨 98%聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%，體：石油

兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒天門冬氨氨轉(zhuǎn)移(AST)試劑盒(賴氏微板法)FMOC-L-Β-同型亮氨 96%聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=7%，體：石油

兔子間粘附分子2(ICAM-2/CD102)試劑盒天門冬氨氨轉(zhuǎn)移(AST)試劑盒(賴氏微板法)N-Fmoc-N'-三苯-L-組氨五氟苯酯 75%芐嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3

兔子間粘附分子2(ICAM-2/CD102)試劑盒天門冬氨氨轉(zhuǎn)移(AST)試劑盒(賴氏比色法)Fmoc-D-氨  BR草除靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%

兔子間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒天門冬氨氨轉(zhuǎn)移(AST)試劑盒(單試劑法)N-Fmoc-N'-(4-氧-2,3,6-三磺酰)-L-精氨  98%噻 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%

兔子間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒天門冬氨氨轉(zhuǎn)移(AST)試劑盒(單試劑法)N-芴氧羰-N'-苯磺酰-L-精氨 98%噻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%

兔子透明質(zhì)(HA)試劑盒γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移(GGT)試劑盒(重氮微板法)Fmoc-D-天冬酰 BR噻標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%
VPI血管活性肽酶抑制劑ELISA試劑盒用途：

變色2R和亮綠SF聯(lián)合染色法

注意事項(xiàng)：

染色結(jié)果為：髓鞘呈深紅色，軸索和間質(zhì)呈綠色，脫髓鞘纖維不著色。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。