ANG血管抑素/血管穩定蛋白ELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)試劑盒過硫銨溶液(AP,10%)1,2-（EDB） 99%0.95

大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒TEMED1,4-二溴丁烷 98% 分析標準品，95%

大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒TEMED1,5-二溴戊烷 98%黃豆原 分析標準品，≥98%

大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒溴酚藍水溶液(1%)1,6-二溴己烷 97%黃豆原 98%

大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒溴酚藍水溶液(2%)間二溴苯 97% 分析標準品，≥95%

大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒磷鹽-SDS電泳緩沖液(4×)溴代異戊烷 96% 95%

大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒CL蛋白抑制劑混合液(1mg/ml)溴乙酯 97%鬼臼素 98%

大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)溴烷 >99.0%(GC)鬼臼素 分析標準品，>98%

大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)三溴 AR,98% ≥99.0% (HPLC)

大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)香柏油 FMP(顯微鏡用）東莨菪氫鹽 98%

大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒蛋白抑制劑混合液(100×PIC)代十六烷 97%粉防己 分析標準品，≥98%

大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)試劑盒乙酰(10mg/ml)烯酰, 96%,含~0.05% 噻吩穩定劑維D3 98%

大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)試劑盒焦亞硫鈉溶液(100×)2-氨-6-吡啶 98%維D3 分析標準品

大鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)試劑盒亮抑肽溶液(lepueptin,1mg/ml)乙烯酯 99%二茂鐵 99%

大鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)試劑盒胰蛋白抑制劑溶液(1mg/ml)2-氨-5-吡啶 99%草二酯 CP，98%

大鼠質金屬蛋白1(MMP-1)試劑盒 抑肽溶液(Aprotinin,2mg/ml)溴烯, 包含≤1000 ppm 氧化烯穩定劑, 98%草二酯 GR，99%
ANG血管抑素/血管穩定蛋白ELISA試劑盒用途：

乳脫氫酶染色

注意事項：

主要由四氮唑藍孵育液、陰性對照組成。染色后酶活性部位呈藍紫色沉淀。

儲存條件：4℃，避光，6個月