ASD雄烯二酮ELISA試劑盒

產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

兔子端粒(TE)試劑盒α-淀粉（枯草桿菌）芴氧羰-O-叔丁-D-蘇氨 98%標準溶液 100μg/ml,u=3%（劇品）

兔子單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒高峰α-淀粉FMOC-L-色氨五氟苯酯    98.0%標準溶液 10μg/ml,u=6%（劇品）

兔子單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒高溫α-淀粉Fmoc-D-Trp-OPfp 98%異惡草 分析標準品，98%

兔子促上腺皮質激素(ACTH)試劑盒β-淀粉N-Fmoc-O-芐-L-磷酪氨 98%硫線磷 分析標準品，92%

兔子促上腺皮質激素(ACTH)試劑盒β-淀粉Fmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%磺隆 分析標準品，94%

兔子促卵泡素(FSH)試劑盒果膠Fmoc-O-磷-L-酪氨 98%環嘧磺隆 分析標準品，96%

兔子促卵泡素(FSH)試劑盒果膠Fmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%殺鼠 分析標準品，99%

兔子促狀腺素(TSH)試劑盒果膠FMOC-L-纈氨五氟苯酯  98.0%鼠 分析標準品，98%

兔子促狀腺素(TSH)試劑盒果膠FMOC-L-苯氨五氟苯酯  96%敵草快 分析標準品，96%

兔子雌二(E2)試劑盒果膠Y-23N-酰-DL-色氨 98%2,5-二苯氧乙標準溶液100μg/ml，溶劑：

兔子雌二(E2)試劑盒果膠Y-23N-Fmoc-N'-Boc-L-2,3-二氨   97%惡唑 分析標準品，95%

兔子腸脂肪結合蛋白(iFABP)試劑盒菠蘿蛋白Fmoc-D-3-(1-萘)氨 ≥98.5% 分析標準品，99.3%

兔子腸脂肪結合蛋白(iFABP)試劑盒菠蘿蛋白Fmoc-3-(1-萘)-L-氨 98%標準溶液 10μg/ml,u=5～3%，

兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒 菠蘿蛋白Fmoc-3-(2-萘)-D-氨 98% 硫新斯的明 98%

兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒 菠蘿蛋白Fmoc-3-(2-萘)-L-氨 98%二磷 分析標準品,98%

兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒菠蘿蛋白FMOC-D-3-(3-吡啶)-氨 98%二磷標準溶液 10μg/ml,u=6～4%，
ASD雄烯二酮ELISA試劑盒用途：

尸檢中的新鮮心臟組織和腦組織以及實驗動物模型早期梗死組織的染色，測定腦梗死灶體積

注意事項：

TTC與正常組織中的呼吸酶反應而呈紅色，而缺血組織內呼吸酶活性下降，不能反應，故不會產生變化呈蒼白色。

儲存條件：4℃，避光，6個月

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。