CK-13細(xì)胞角蛋白13ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

靶向核糖核(TR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-2-羥磺二戊 99%鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2000mol/L(0.2N)

過氧化還原5(PRDX5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-2-羥磺N,N-二乙 99%鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1000mol/L(0.1N)

白介素1受體Ⅰ(IL1R1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-2-羥磺二異丁 99%鹽溶液 6mol/L(6N)

XII B組磷脂A2(PLA2G12B)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-2-羥磺鈉鹽二異丁 99.5%鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μ/ml

白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-2-羥磺鈉鹽二異 Standard for GC ≥99.5% (GC)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μ/ml

白介素2受體β(IL-2Rβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-(2-乙磺)二異  >99.5%(GC)標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L (0.1N)

白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-(2-乙磺)二異 CP,98%鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L，溶劑：1%硝

白三烯C4(LTC4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-(2-乙磺)二異 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>99.5% (GC)鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml

白三烯D4(LTD4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N-乙磺鈉鹽二異  >99.0%(GC)硝汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.005000mol/L(0.01N)（劇品）

白三烯E4(LTE4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 N-(2-羥乙)哌-N-乙磺鈉鹽鄰苯二二異丁酯 99%硝鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.01000mol/L(0.01M)

白彈性蛋白(HLE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 N-(2-羥乙)哌-N-乙磺鈉鹽二乙 standard for GC, ≥99.5% (GC)鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml

白調(diào)節(jié)素(LR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 N-(2-羥乙)哌-N'-4-丁磺二乙 AR,99.0%鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml

白共同抗原(LCA/CD45)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-(2-羥乙)哌-N'-4-丁磺二乙 CP,97.5%化溶液 3.3mol/L(3.3N)

白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒哌-N,N-雙（2-乙磺）二乙 GC化溶液 3mol/L(3N)

白血病抑制因子受體(LIFR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒哌-N,N-雙（2-乙磺）二乙 GR,99.50%重鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 1/24mol/L(0.25N)

甘氨酰tRNA合成(GARS)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  哌-N,N-雙（2-乙磺）二乙 ACS重鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 1/60mol/L(0.1N)
CK-13細(xì)胞角蛋白13ELISA試劑盒用途：

細(xì)胞核染色，可用于免疫組化的復(fù)染

注意事項(xiàng)：

染色結(jié)果為：細(xì)胞核呈綠色。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，6個(gè)月

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。