PYCARD細胞凋亡相關斑點樣蛋白ELISA試劑盒

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

超氧化物歧化1(SOD1)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-2-氨乙磺鈉鹽乙正酯 AR,99.0% 萘唑啉鹽鹽 99%

成骨生長肽/成骨多肽(OGP)聯免疫吸附測定試劑盒 N-三（羥）-2-氨乙磺鈉鹽 AR吲哚-5-羧 98%

成熟促進因子(MPF)聯免疫吸附測定試劑盒 N-三（羥）-2-氨乙磺鈉鹽 99.6%，1μm造沸石 CP,97%

成纖維生長因子23(FGF23)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺 99.8%,10μm,,高白度2-乙鹽鹽  98%

成纖維生長因子9(FGF9)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺 99.8%,25μm氧鹽鹽 98%

成纖維生長因子結合蛋白1(FGFBP1)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺鄰苯二丁芐酯 分析標準品2,2,3,3-四氟烯酯  97%,含50ppm BHT穩定劑

成纖維生長因子結合蛋白2(FGFBP2)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺鈉鹽鄰苯二丁芐酯標準溶液 1000μg/ml，溶劑：環庚三烯酚 98%

成纖維生長因子受體底物2(FRS2)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺鈉鹽鄰苯二丁芐酯 98%2-氨-5--2'-氟二苯 98%

成纖維生長因子受體底物3(FRS3)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）-3-氨磺鈉鹽過氧化氫異苯 80-85 %2-氨-5-溴-2'-氟二苯 98%

遲現抗原(VLA)聯免疫吸附測定試劑盒 N-三（羥）氨-2-羥磺過氧化環己  50%鄰苯二二辛酯溶液α-溴鄰 98%

穿孔蛋白1/成孔蛋白(PRF1/PFP)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）氨-2-羥磺硬脂鈣 Ca 6.6-7.4%11-溴十一 98%

卵泡激素受體(FSHR)聯免疫吸附測定試劑盒 N-三（羥）氨-2-羥磺二苯二聚酯 80%11-溴十一 98%

垂草扁桃(VMA)聯免疫吸附測定試劑盒 N-三（羥）氨-2-羥磺鈉鹽2-乙己二苯磷酯 90%4-丁 98%

角質轉谷氨酰(TGM1)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）氨-2-羥磺鈉鹽硬脂鋰 90%2,3-二乙酯 97%

垂體腺環化激活肽受體 (PACAPR)聯免疫吸附測定試劑盒N-三（羥）氨-2-羥磺鈉鹽硬脂鎂 AR，Mg 4.0-5.0%2-羥苯乙 98%

肝配蛋白A受體10 (EPHA10)聯免疫吸附測定試劑盒3-[N，N-雙（2-羥乙）]氨-2-羥磺硬脂鈉 USP級2-氨3,5-二溴苯酯 98%
PYCARD細胞凋亡相關斑點樣蛋白ELISA試劑盒用途：

用于生物化學活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學染色，多用于轉基因植物的GUS基因表達。

注意事項：

染色原理是適宜的反應條件下，β-葡萄糖酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質，該物質不溶解于轉基因的細胞核組織中的靛藍物質，具有GUS活性的部位或位點呈現藍色或藍色斑點，可用肉眼或顯微鏡觀察到。

儲存條件：-20℃，避光，12個月