沙雷菌通用PCR檢測試劑盒廠家

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
DimethylmatairesilN-乙酰-L-脯氨酸 98%2,6-二氯苯肼鹽酸鹽 98%

Drimiopsin CN-乙酰-L-纈氨酸 98%2,6-二氟吡啶-3-酸 95%

Drimiopsin DDL-精氨酸 98%3,4-二氯苯肼鹽酸鹽 97%

EuxanthoneL-精氨酰胺 98%2-氟苯肼鹽酸鹽 97%

gamma-MangostinN-乙酰-L-色氨酸 98%3-氟苯肼鹽酸鹽 97%

Garcinexanthone AN-乙酰-D-蛋氨酸 99%6-氟吡啶-3-酸 96%

Garciniaxanthone EN-CBZ-D-氨酸 96%2-氟吡啶-3-酸 97%

Garcine CDL-氨酸甲酯鹽酸鹽 98%2-羥基-5-氟吡啶 97%

Garcine DL-天門冬氨酸-4-叔丁基酯 98%2-氟-5-羥基吡啶 95%

Garcine EN-乙酰-D-色氨酸 98%3-氟-5-羥基吡啶 97%

GartaninD-氨基 98%3-氟-2-羥基吡啶 97%

GentiseinD-a-氨基己二酸 97%2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸 98%

GriffipavixanthoneD-天門冬氨酸-β-甲酯 BR2-氟-3-羥基吡啶 97%

Iriflophene 3-C-beta-D-glucopyrasideD-氨酸乙酯鹽酸鹽 BR4-氟苯肼鹽酸鹽 97%

IriflopheneL-天門冬氨酸-β-芐酯  98%4-羧基苯肼鹽酸鹽 98%

Isogarciniaxanthone ED-天門冬氨酸-β-芐酯 BR2-肼基苯甲酸鹽酸鹽 98%

對溴苯氧乙酸(>95%,Ind Grade)eIF3C AntibodyPhospho-Lyn (Tyr396)  磷酸化膜相關蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體

對基苯甲酸(>98%,BR)DLK1 Antibodyphospho-LSP1 (Ser252)  磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體

對乙氧基苯甲(>98%,BR)ENPP1 Antibody (Human Specific)phospho-LSP1 (Ser204)  磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體

4-羥基(>98%,BR)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Phospho-LRP6(Thr1479)  磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體

4-苯甲酸(>98%,BR)Mili AntibodyPhospho-LRP6 (Ser1490)  磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體

對甲苯(>98.5%,BR)MATK/CHK (D2I6U) Rabbit mAbphospho-LRP5(Thr1492)  磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白5抗體

對甲氧基苯乙酮(>98%,BR)Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Antibodyphospho-LRP1(Ser4523)  磷酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體

4-甲氧基酚(>98%,BR)Naked2 (C67C4) Rabbit mAbphospho-LLGL1 + LLGL2(Ser650+Ser654)  磷酸化相似腫瘤抑制基因HUGL抗體

對甲基肉桂酸(>98%,BR)Naked2 (C67C4) Rabbit mAbPhospho-LKB1(Thr189)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體

4-甲基傘形酯-N-乙酰-b-D-氨基半乳糖苷(>98%,BR)Axin1 (C95H11) Rabbit mAbphospho-LKB1(Ser428)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體
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