鳥類髓細胞瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人P0蛋白抗體（IgM）elisa試劑盒Anti-CST3 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物  

人NOD樣受體（NLR）elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學  

人G1/S特異性細胞周期蛋白E1（CCNE1）elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 染色質(zhì)和核信號 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 Alzheimer's  

人FAM172A蛋白（FAM172A）elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

人COLL2-1NO2 elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

人CC趨化因子受體1（CCR1）elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 糖尿病  

人B細胞生長因子（BCGF）elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 糖尿病 轉(zhuǎn)運蛋白  

人Bcl-2樣蛋白1（BCL2L1）elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 G蛋白偶聯(lián)受體  

牛血清淀粉樣蛋白A（SAA）elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 表觀遺傳學  

牛鋅金屬硫蛋白（Zn-MT）elisa試劑盒Anti-CTAG1A Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 激酶和磷酸酶  

牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 發(fā)育生物學 生長因子和激素 細胞周期蛋白  

牛維生素A（VA）elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody(原貨號PB0400)研究領(lǐng)域  細胞生物 染色質(zhì)和核信號 細胞周期蛋白 表觀遺傳學  

綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B（SP-B）elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody(原貨號PB0401)研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 細胞周期蛋白  

大鼠可溶性CD80（sCD80）elisa試劑盒Anti-CTCF Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化  

大鼠抗中性粒細胞核周抗體（pANCA）elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化  

Bacillusanthracisphage

M-ENDO broth 膜過濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克 incubation media M-ENDO broth 膜過濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克

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SIM動力培養(yǎng)基 250g 動力試驗

CLED培養(yǎng)基添加劑  CLED Medium Supplement  1毫升×5支  加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中

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中國倉鼠卵巢細胞，CTLA4 IG-24細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬鼻甲黏膜成纖維細胞，PT-K75細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬肺泡巨噬細胞，3D4/21細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬腎，PK-1細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬腎，PK-13細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。