小鼠ELISA試劑盒的競(jìng)爭(zhēng)法實(shí)驗(yàn)步驟分析

　　小鼠ELISA試劑盒定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中相關(guān)物質(zhì)含量。常用方法包括雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。今天我們來聊聊競(jìng)爭(zhēng)法，競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體有多種模式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，洗滌后再加入酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)，抗HBe的檢測(cè)一般采用此法。
 

　　小鼠ELISA試劑盒的競(jìng)爭(zhēng)法實(shí)驗(yàn)步驟如下所述：
 

　　1.以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋(預(yù)試中確定)加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中(50ul/孔)，加封口膠帶于37℃作用30min；
 

　　2.棄反應(yīng)液，以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干；
 

　　3.加入酶標(biāo)抗體(濃度在預(yù)試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min；
 

　　4.重復(fù)第2步；
 

　　5.加底物(濃度在預(yù)試中確定)，小鼠ELISA試劑盒加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時(shí)觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔；
 

　　6.在酶標(biāo)儀中測(cè)定OD值，OPD用492nm測(cè)定，TMB用450nm測(cè)定。