探討大鼠ELISA試劑盒應(yīng)用時(shí)的檢測(cè)程序

更新時(shí)間：2021-11-10

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　　大鼠ELISA試劑盒用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用。

　　大鼠ELISA試劑盒試驗(yàn)時(shí)制備試劑與收集血樣：

　　1.收集標(biāo)本

　　血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。正常標(biāo)本測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液作1：10稀釋。

　　2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制

　　使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成10ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，1管加標(biāo)本稀釋液900ul，2-8管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在1管中加入10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至2管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第7管中吸出500ul棄去。第2管為空白對(duì)照。

　　3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1：10倍稀釋（1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

　　4.洗滌液：用重蒸水1：20稀釋（1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）。

　　相關(guān)檢測(cè)程序：

　　1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘；

　　2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干；

　　3.每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘；

　　4.洗板：同前；

　　5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘；

　　6.洗板：同前；

　　7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘；

　　8.每孔加入100ul終止液混勻；

　　9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。