線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）樣本的前處理

線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm)樣本的前處理：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器

或研缽勻漿。

2、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。

3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。

4、 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 α-KGDH（此步可選做）。

5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或

200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），用于線粒體 α-KGDH 活性測(cè)定。

測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定

（1）在試劑五中加入 18mL 試劑四充分溶解，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）

水浴 10min；現(xiàn)配現(xiàn)用；

（2）在試劑六中加入 1mL 蒸餾水，充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用；

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑六和 180μL 試劑五，混

勻，立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A2-A1。

內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體

紅細(xì)胞分化相關(guān)因子1抗體

微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體

內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體

雌激素受體β抗體

雌激素受體α抗體

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體

Ephrin A2抗體

大腸埃希菌菌體蛋白抗體

雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶抗體

E Tag標(biāo)簽抗體

登革熱病毒包膜糖蛋白E抗體

食道癌相關(guān)基因抗體

EB病毒核抗原抗體-3A抗體

膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白1抗體

轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體

內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體

外胚層發(fā)育不良抗體

E2 tag標(biāo)簽抗體

鐵螯合酶抗體

DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體

上皮細(xì)胞粘附分子抗體

酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體

表皮生長(zhǎng)因子抗體

表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體

酪氨酸蛋白激酶A4受體抗體

上皮鈣粘附分子抗體