C57BL/6小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；RMA培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)

C57BL/6小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；RMA培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。
3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。
5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

 NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞
H9c2大鼠心肌細(xì)胞（ATCC來(lái)源）
C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞
NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系
CHO, 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞
SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞
BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞
HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞
HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞
RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
GC-1, 鼠精原細(xì)胞
293A，人胚腎上皮細(xì)胞系（腺病毒包裝級(jí)別）
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞
293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系
EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞
HBE, 正常人支氣管上皮細(xì)胞系
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細(xì)胞
HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系
HUM, 正常人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
HAVSMC, 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
LX-2, 人肝星形細(xì)胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞